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Johannes Schenkel
Redaktion: Stefanie Wolf
Transgene Tiere
2. Auflage, 232 Seiten, 80 Abb., Paperback
Springer-Verlag GmbH & Co. KG | ISBN: 354028267x
| |  | 29.95 EUR |  | | |
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Vorwort Seit etwa 25 Jahren ist die transgene Technologie, die Generierung stabiler gezielter Säugermutanten, zuverlässig verfügbar. Diese Tiere dienen - vor allem im Mausmodell - der Beantwortung vielfältiger Fragestellungen, wie der Genregulation, der Entwicklungsbiologie oder dem Verständnis pathophysiologischer Mechanismen. Transgene Tiere lassen sich auch als effektive Testsysteme einsetzen. In großen Spezies kann diese Technik produktiv genutzt werden, z. B. für die Xenotransplantation ode...
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Transgene Tiere Vom Einzeller zum transgenen Tier - Wie funktioniert das? Johannes Schenkel beschreibt anschaulich aus molekularbiologischer und versuchstierkundlicher Sicht die Techniken, mit denen transgene Tiere generiert und gezüchtet werden. Ausgehend von den Grundlagen der Embryologie und Molekularbiologie werden am Mausmodell alle benötigten Methoden erläutert. Der Nachweis des Transgens wird ebenso ausführlich erklärt wie Zucht, Haltung, Sicherung transgener Tiere und Hygienefr... [weiter lesen] |
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Johannes SchenkelPrivatdozent am Institut für Physiologie und Pathophysiologie der Universität Heidelberg und Leiter der Embryobank am Deutschen Krebsforschungszentrum, Heidelberg [weiter lesen] |
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Inhaltsverzeichnis
1 Einführung 1
1.1 Strategien zur Generierung transgener Tiere 3
1.2 Nutzen der transgenen Tiere 5
1.2.1 Genregulation 6
1.2.2 Entwicklung 6
1.2.3 Krankheiten 7
1.2.4 Produktiver Nutzen 10
1.2.5 Testsysteme 11
2 Grundlagen der Embryologie und Molekularbiologie 13
2.1 Embryonalentwicklung der Maus 13
2.2 Die Fellfarbe der wichtigsten Labormäuse und deren Genetik 16
2.2.1 A - Agouti 17
2.2.2 B - Braun 17
2.2.3 C - Albino 18
2.2.4 D - Dilute 18
2.3 Die Herkunft der Labormäuse 18
2.3.1 Inzuchten, Nomenklatur 20
2.3.2 Hybride 21
2.3.3 Coisogene und congene Tiere 21
2.3.4 Auszuchten 22
2.4 Molekular- und zellbiologische Methoden zur Generierung und Charakterisier...
2.4.1 cDNA-Klonierung 23
2.4.2 Klonierung genomischer Genabschnitte 23
2.4.3 RNA-Interferenz 25
2.4.4 Vermehrung und Selektion klonierter Gene 26
2.4.5 Southern Blot 27
2.4.6 Northern Blot 29
2.4.7 Polymerasekettenreaktion (PCR)29
2.4.8 Reverse Transkriptase-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR)31
2.4.9 Western Blot 32
2.4.10 Transfektion von Zellen 32
2.4.11 Hefen 34
2.4.12 Gewebeschnitte 34
2.4.13 Zytometrie 36
2.4.14 Die Aktivität der ß-Galaktosidase 37
2.4.15 Die Aktivität des Green Fluorescent Proteins 38
3 Generierung transgener Tiere, weitere Mutanten 39
3.1 Vorkern- oder Pronukleus-injizierte transgene Tiere 39
3.2 Homologe Rekombination, Gene Targeting 41
3.3 Kombinierte Verfahren 42
3.4 Viraler Gentransfer 44
3.5 Weitere Mutanten 46
3.5.1 Spontane Mutanten 46
3.5.2 Induzierte Mutanten 46
3.5.3 ENU-Mutanten 46
3.5.4 Kerntransfer 48
4 Vektoren 49
4.1 Vektoren zur Generierung transgener Tiere (Überexprimierer, Pronukleus-Tran...
4.1.1 Expression des Transgens 49
4.1.2 Reportergene 51
4.1.3 RNA-Interferenz 52
4.1.4 Regulation des Transgens 53
4.1.5 Integration des Transgens ins Wirtsgenom 57
4.2 Vektoren zur Generierung von homologen Rekombinanten 51
4.2.1 Targetingvektoren 58
4.2.2 Knock in-Mutanten 61
4.2.3 Konditionale Mutationen 62
4.3 Anreicherung rekombinierter Klone in Kultur 62
4.3.1 Positive Selektion 64
4.3.2 Negative Selektion 65
4.4 Trap Vektoren 65
4.5 Vektoren für die Virusintegration 69
5 Gewinnung von Eizellen und Embryonen in verschiedenen Stadien sowie deren ...
5.1 Superovulation 74
5.2 Präparation von Ovidukt und Uterus 76
5.3 Präparation der Oozyten und Embryonen 79
5.3.1 Einzeller (Oozyten und Zygoten)79
5.3.2 Zwei- bis Achtzeller 81
5.3.3 Blastozysten 82
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Index
AAbstoßungsreaktion 9, 10
Achtzeller 22, 81, 82, 100, 106
Adenovirus 46
Aedes 188
Agarosegel 27, 28, 30, 31, 122
Aggregationschimäre 89, 90, 99, 100, 101, 163
Agouti 16, 17, 20
Albino 16-18, 20
Alzheimersche Krankheit 8, 189
Amme 40, 42, 44, 97, 105, 106, 111-113, 139, 146, 148, 149, 153, 154, 174
Ampulle 79, 80, 106
Analgesie 104, 108
Analyse 8
ANDi 184
Anopheles 188
Antibiotikum 32
Antifreeze-Gen 186
Antikörper 11, 32-37, 50, 51, 115-117, 123-126, 128, 129, 151, 154, 185, 198, 200
Antiserum 173
Antitrypsin 179
Anzeige 195
Apoptose 9
Arteriosklerose 9, 172
Aufzeichnungspflicht 192, 195
Aufzucht 105, 106, 110-112
Ausfallmutante s. auch Knock-out 58, 114-116, 119, 120, 128, 135, 140, 168
Auszucht 15, 22, 74, 104, 133, 149
Autoimmunerkrankung 9, 10, 171, 172
Autoimmunität 9
Autoklav 162-164
BBAC 55, 57
Bakterienchromosomen, artifizielle s. auch BAC 23
Bakteriophage s. Phage
Beauftragter für die Biologische Sicherheit (BBS) 193
Beethoven-Mutation 48
Begasungsschleuse 162
Belastung (Versuchstiere) 197
Benutzerordnung 164
Bioreaktor 171, 178, 184
Blastocoel 86, 97, 98
Blastoderm 185
Blastozyste s. auch Embryo 13, 14, 21, 22, 39-43, 47, 58, 78, 79, 82-93, 97, 98, 100,...
Blut 175
Bluthochdruck 171
Blutlymphozyten, periphere 115, 116, 128
Braun 17
Bruce-Effekt 74
Buffalo Rat Liver Zellen 87
Burch, R.L. 141, 200
CC. elegans 26, 188
CAT 51, 186
cDNA
- Bank 23
- Bibliothek 23
cDNA Gen 49
Cervix 78, 79
Charakterisierung 5, 22, 41, 120
Chimäre 42-45, 65, 85, 89, 90, 100, 109, 110
Chloramphenicolacetyltransferase s. auch CAT 51
Chromatophore 16
Cis-aktivität 68
CO 2 168
CO 2 -Inkubator 91, 168, 174, 176
Cokultur 179
Cold Spring Harbor 19
Computertomographie 129
Congene 134
Congenics s. congene Core-Facility 167
Cotransfer 108
Cre 42, 62, 63
Creutzfeld-Jacob-Krankheit 10
Cumuluszellen 79, 80
DDatenbank 11, 27, 113, 118, 150, 166
Deckel 113, 158, 161
Diabetes 9, 171
Diagnostik 129, 154, 182
DICER 26
Differenzierung 14, 15, 41, 43, 87, 88, 111
Dikussionsaufsatz 169
Dilute 17, 18, 20
DNA 18, 23-32, 39-49, 55, 57-61, 70, 85, 88, 91, 93, 94, 99, 115, 119, 122, 174, 177,...
DNA-Konstrukt 39, 40, 58, 99
Dolly 48
Donor s. auch Embryonenspender, Spendertier 179, 189
Doxyzyklin 54-56
Drosophila 1, 13, 186, 188
Druckluft 168
Dry Shipper 150
EEDTA 57
Ei 185
Eileiter s. auch Ovidukt 22, 40, 45, 73-81, 106, 107
Einfriergerät 146
einzeln ventilierte Käfige s. IVC Einzeller 14, 22, 79
Eizelle s. auch Oozyte 13, 22, 39, 40, 73, 79-84, 145, , 148, 149, 177, 182, 183, 185...
Elektroporation 32, 34, 47, 64, 69, 88, 187
Embryo s. auch Achtzeller, Blastozyste, Morula, Vierzeiler, Zweizeiler, Zygote 13-16,...
- transferierter 47, 93, 97-100, 106-110, 146, 149, 154, 174-179, 183
- Zahl 155
Embryobank 150
Embryonalentwicklung 6, 13-15, 22, 44, 52, 68, 74, 86, 112
Embryonen
- Diploide 101
- Tetraploide 101
Embryonenspender s. auch Donor,
- Spendertier 41, 43, 45, 76, 106, 136, 144, 155, 173, 176
Embryotransfer s. auch Transfer 40, 43, 45, 103, 105, 108, 110, 111, 136, 139, 144-15...
- Uterus 108, 109, 163
- Blastozyste 108, 109
Empfängertier s. auch Rezipient 39, 40, 84, 93, 106, 108, 119, 154, 173, 179, 183, 18...
Enhancer 65, 70
Enhancer-Trap s. auch Trap 65, 66, 68
Enrichment 164
Entwicklungsstadium 14, 74, 105
ENU s. auch Mutante 46-48
Epidydimis 148
Epigenese 5, 48
Erreger 8, 150-54, 158, 159, 181, 184, 192
ES-Zellen 4, 39-44, 47, 58, 61, 62, 64, 65, 69, 85-91, 93, 95, 97, 98, 100, 101, 110,...
Ethiudiumbromid 27, 30, 31, 122
Europäisches Patentübereinkommen (EPÜ) 198-200
European Mouse Mutant Archive (EMMA) 19, 149, 150
Exon 41, 59-62, 65, 67-69
Exon/Intron-Struktur 23, 49, 50, 68
Expression 3-6, 15, 25, 34, 39, 44, 47, 49-51, 54-57, 65-68, 85, 117-120, 123-125, 12...
Expressionsmuster 37, 39, 41, 50-53, 65, 68, 120
Expressionssystem, induzierbares 3, 53, 54
Exprimierbarkeit 49, 50
FFaktor VIII 11, 180, 200
Farbstoff 36, 116, 128
FDG 51
Feeder Layer 86-89
Feeder Zellschicht s. Feeder Layer
FELASA 151
Fellfarbe 13, 16-20, 90, 104, 108-111, 117, 136
Fettstoffwechsel 9
Fibroblasten 86, 87, 184
Filament 94, 98
Filter 27, 57, 87, 125, 158, 161, 163, 168
Filterdeckel 161
Fisch 186, 187
FITC 36
Floxed gene s. auch loxP, Cre, konditionale Mutation 42, 62, 63
Floxed mouse s. floxed gene Fluoreszenz 27, 36-38, 52, 66, 115-117, 122, 124, 125, 12...
Founder 40, 47, 53, 54, 57, 108, 115, 119, 131, 132, 135, 137, 175
Founder Line, transgenic (ransgene Founderlinie) 40, 54, 132, 137
FSH 172, 173, 178, 181, 182
Fusionsprotein 64, 66 , 67
Futterraufe 158
GG 418 64, 88
gain of function 3, 4, 39, 40
- ß-Galaktosidase 6, 15, 37, 51, 66, 125
Gancyclovir (GANC) 64, 88
Geflügel 174, 184-186
Gelelektrophorese s. auch Agarosegel, SDS-Polyacrylamidgel 27, 168
Gen 1-11, 16-21, 23-30, 32, 34, 37, 39, 41, 42, 44, 45, 49-71, 85, 88, 91, 119-123, 1...
- essentielles 4, 7, 52, 119, 140
Genaktivität 5, 6
Gendrift 147
Gene-Pharming 10, 179
Gene Targeting s. auch homologe Rekombination, Targeting 41, 57, 69
Generierung 4, 13, 22, 23, 29, 39, 40, 43, 44, 47, 49-51, 54, 55, 58, 61, 62, 69, 71,...
Gene-Trap s. auch Trap 65-69
Genfragment 26, 59
Geninaktivierung 4, 52
Genkonstrukt 3, 27, 32, 39, 40, 45, 49, 50, 53, 55, 57, 65, 66, 68, 168, 175-177, 182...
Genom s. auch Virusgenom, Wirtsgenom, Zielgenom 3, 18, 25, 29, 39-41-44, 58, 65, 69, ...
Genotyp 17, 47, 115, 133, 134, 144
Genotypisierung 108, 115, 116, 135, 139
Gentechnikrecht 5, 157, 191
Gentransfer 1, 4, 10, 44-47, 69-71, 99, 140, 175, 177, 184, 185, 187, 188
Gentechniksicherheitsverordnung (GenTSV) 99, 192, 193
Gesellschaft für Versuchstierkunde (GV-SOLAS) 164-167, 194, 196
Gewebekleber 104, 108
Gewebeschnitte s. auch Ultradünnschnitte 34, 38, 52, 125, 126, 169
Gefrierschnitte 35, 125, 126, 169
- Paraffinschnitte 125, 169
- Embryo 127
GFP/EGFP 6, 38, 52, 65, 68, 98, 117, 124, 125, 137, 169, 184, 187
Glasschneider 94
Gonadotropin s. PMSG Gonadotropin, chorionic s. hCG GPI 90
Green Fluorescent Protein s. GFP/EGFP Größenmarker 27
HHaarfollikel 16, 17, 52, 117, 125
Haltung
- artgerechte 157, 164, 165, 194
- Fisch 186
- Goldhamster 165
- Maus 165, 166
- Meerschweinchen 165
- Ratte 165, 166
Haltungsgenehmigung 194
Harvey, William 18
Haustier
- Maus 18, 19
- transgen 171, 172
Hauttransplantation 129
hCG 22, 73-75, 79, 172, 173, 175, 187
Hefe 4, 26, 34, 44, 55, 179, 192
Hefechromosomen, artifizielle s. auch YAC 23, 55
HEK 293 T Zellen 70, 71
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