DeutschesFachbuch.de : Der Experimentator: Molekularbiologie / Genomics Molekularbiologie / Genomics Von Cornel Mülhardt

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Inhalt
1 Was ist denn "Molekularbiologie", bitteschön? 1
1.1 Das Substrat der Molekularbiologie, oder: Molli-World für Anfänger 2
1.2 Was brauche ich zum Arbeiten? 7
1.3 Sicherheit im Labor 9
2 Einige grundlegende Methoden 12
2.1 Nucleinsäure ist gleich Nucleinsäure und auch wieder nicht 12
2.2 Methoden zur DNA-Präparation 14
2.2.1 Bakterienmedien 14
2.2.2 Präparation von Plasmid-DNA 16
2.2.3 Minipräparation 16
2.2.4 Maxipräparation 18
2.2.5 Präparation von Phagen-DNA 20
2.2.6 Präparation einzelsträngiger DNA mittels Helferphagen 25
2.2.7 Präparation von genomischer DNA 25
2.3 Die Reinigung von Nucleinsäuren 27
2.3.1 Phenol-Chloroform-Extraktion 27
2.3.2 Anionenaustauschersäulen 29
2.3.3 Glasmilch / Silica-Membranen 31
2.3.4 Cäsiumchlorid-Dichtegradient 32
2.3.5 Fällung mit PEG 33
2.3.6 Dialyse 34
2.3.7 Magnetic Beads 35
2.3.8 Proteinbindende Filtermembranen 35
2.3.9 Alkohol-Fällung 36
2.3.10 Konzentratoren 36
2.3.11 Exonuclease-Phosphatase-Verdau 36
2.4 Konzentrieren von Nucleinsäuren 37
2.4.1 Alkohol-Fällung 37
2.4.2 Konzentratoren 40
2.4.3 Speed-vac 41
2.4.4 "Aussalzen" 42
2.5 Konzentrationsbestimmung von Nucleinsäurelösungen 42
3 Das Werkzeug 47
3.1 Restriktionsenzyme 47
3.2 Gele 58
3.2.1 Agarosegele 58
3.2.2 DNA-Fragmente aus Agarosegelen isolieren 66
3.2.3 Polyacrylamidgele (PA-Gele) 70
3.2.4 DNA-Fragmente aus PA-Gelen isolieren 73
3.2.5 Pulsfeldgelelektrophorese (PFGE) 73
3.2.6 Kapillarelektrophorese 74
3.2.7 Mikrochip-Kapillarelektrophorese 75
3.3 Blotten 75
3.3.1 Southern Blot 76
3.3.2 Northern Blot 79
3.3.3 Dot und Slot Blot 81
4 Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 84
4.1 Die Standard-PCR 84
4.2 Neue Entwicklungen 96
4.3 Tipps zur Verbesserung der PCR 96
4.3.1 Nested PCR 99
4.3.2 Multiplex PCR 100
4.3.3 Amplifikation langer DNA-Fragmente (>5 kb) 100
4.4 PCR-Anwendungen 101
4.4.1 Reverse Transkription - Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) 101
4.4.2 Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) 102
4.4.3 Amplifikation zufälliger Produkte 104
4.4.4 Klassische quantitative PCR 106
4.4.5 Real-time quantitative PCR 109
4.4.6 Inverse PCR 115
4.4.7 Biotin-RAGE und Supported PCR 116
4.4.8 Mutagenese mit modifizierten Primern 116
4.4.9 Amplification Refractory Mutation System (ARMS) 117
4.4.10 in-situ-PCR 118
4.4.11 Cycle Sequencing 119
4.4.12 cDNA-Synthese 119
4.4.13 Einzelzell-PCR 119
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Register
Digit
3'-Markierung 173
5'-Cap 7, 14
5'-Markierung 172
6-cutter 49
AAbsorptionsmaximum 270
Absorptionsspektrometrie 42
Acetyl-CoA 266
Adenin 2
Adenosin 3
Adenosin-5' -phosphosulfat 202
Aequorea victoria 269
Affinitätschromatographie 35
Agarose 60
- sieving agarose 60
Agarosegele 58
Agarosekonzentration 61
Agar-stabs 166
α -Komplementation 153
Aktivitätstest 51
Alkalische Lyse 17, 19
Alkalische Phosphatase 180
- sekretierte 268
- shrimp alkaline phosphatase 37, 141
Alkohol-Fällung 36, 37
Aminoglykosid-Phosphotransferase 264
Ammoniumacetat 38
Amp 301
Ampicillin 153
Amplification Refractory Mutation System 117
Amplification refractory mutation system 218
anchoring enzyme 130
Anionenaustauscherchromatographie 29
Ankerprimer 102, 103, 105, 207, 208
Annealingtemperatur 86
Antibiotika 64, 153
Antisense-Oligonucleotide 135
Apyrase 202
ARMS 117, 218
arrays 229
ATP-Sulfurylase 202
Auffüllen von Enden 173
Aufnahmekapazität 140
Aussalzen 42
Ausschlussgröße 40, 41
Ausschlusskörperchen 251
Austauschkonstrukte 276
Autoradiographie 177
Azur A 63
Azur B-Chlorid 63
Azur C 63
BBAC 158, 301
Bacterial Artificial Chromosome 158
β-Agarase 70
Bakterien 13
Bakterienlysat 16
Bakterienmedien 14
Bakteriophagen 13, 47
BCIP 301
BES 257
Betain 89
ß-Galactosidase 252, 267, 269
Bioinformatik 285
Biopanning 190
Biotin 130, 202
Blau-weiß-Selektion 153, 160
blunt ends 301
Bluo-Gal 153
Blutproben 26
boiling method 18, 20
Borat 66
Boten-RNA 7
Brilliantkresylblau 63
Bromphenolblau 65
BSA 301
Bsm FI 130
Butanol 36
- Butanol-Fällung 38, 164
CC. elegans 136
Calciumchlorid-Methode 161
Calciumphosphatpräzipitation 257
calf intestine alkaline phosphatase 140
carry-over 98, 164
Cäsiumchloriddichtegradient 236
- kontinuierlicher 32
- Stufengradient 23
CAT 301
CcdB 154
cDNA 301
- Quantifizierung 127
- Synthese 119, 126
Cellulose 30
CG-Inseln 56
chaotrope Salze 67
Charge-Switch Technology 35
CHEF 301
Chemilumineszenz 180
ChIP 211, 235
Chloramphenicol 153, 266
Chloramphenicol-Acetyltransferase 264
Chloroform 65
CHO 301
Chromatin-Immunopräzipitation 211, 235
Chromosomen 12
CIP 140
CMV 301
CNV 233
Codonnutzung 270
cold start 97
Concatemer 132
cos site 157
Cosmide 157
Cre Rekombinase 149
cross-linking 79
crystal violet 67
CTAB 301
cut-ligation 147
Cycle Sequencing 119, 196
Cytidin 3
Cytosin 2
DDAB 301
DAPI 301
DDBJ 301
DEAE 301
DEAE-Cellulose 22
DEAE-Dextran 258
DEAE-Membran 69
Denaturierende Gradientengelelektrophorese 215
Denaturierung 86
DEPC 301
Dephosphorylierung 140, 172
Desoxyribose 2
Dextran 30
DGGE 215
Dialyse 34
Diatomeen-Erde 67
Dicer 135
Didesoxynucleotide 195, 232
Diethylpyrocarbonat 121
Differential display 104
Dimer 131
Dimethylsulfoxid 89
Discosoma striata 270
ditag 132
DMF 301
DMSO 89, 301
DMSO-Stocks 167
DNA 2
- supercoiled 32, 33, 264
DNA array 82
DNA-Chips 201, 229
DNA-Größenmarker 44
DNA-Gyrase 154
DNA-Polymerasen 5
DNA-Quant 46
DNase I footprinting 235
DNA-Stock 167
dominante Marker 264
doppelsträngige RNA 135
Dot Blot 81
DOTMA 259
Dot-Quantifizierung 45
Dpn I 242
DTT 301
EEcdyson-System 281
EcoK I Methylase 56
EcoP 15 I 133
EDTA 301
Einschlusskörperchen 250
Electronic Northern 80
Elektro-Blotter 78
Elektroelution 68, 73
Elektropherogramm 75
Elektrophoresepuffer 60
Elektroporation 163, 256, 261
ELISA 302
Elongation 87
EMBL 302
embryonale Stammzellen 276
EMC 218
Emissionsmaximum 270
emulsion PCR 204
Endocytose 256
Endonuclease VII 219
Entsalzen einer DNA-Lösung 36
Entsorgung 10
Enzymatischer Nachweis von DNA 46
enzyme mismatch cleavage 218
ePCR 204
Epitop 190
EST 80, 199
Ether 28
Ethidiumbromid 9, 32, 45, 61, 63, 214
Exon 6
Exonuclease I 37
Exonuclease III 246
expressed sequence tags 80, 199
Expressionsanalyse 232
Expressionssysteme 249
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